上海百蕊生物科技有限公司

小鼠elisa試劑盒說明書
elisa試劑盒組成：
試劑盒組成
說明書
1份
封板膜
2片
密封袋
1個

酶標包被板
標準品
0.5ml×1瓶
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶
酶標試劑
3 ml×1瓶
樣品稀釋液
3 ml×1瓶

顯色劑A液
3 ml×1瓶
顯色劑B液
3 ml×1瓶

終止液
3ml×1瓶

濃縮洗滌液
20ml×1瓶

elisa試劑盒自備材料：
1. 酶標儀。
2. 自動或者手工洗板機。
3. 恒溫箱。
4. 可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，最好用多通道移液器。
5. 干凈的試管和Eppendof管。

elisa試劑盒操作步驟：
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照圖表在小試管中進行稀釋。
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、 待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl， 然后再加待測樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。

elisa試劑盒標準曲線的繪制注意事項：
1、樣品的濃度等指標是根據標準曲線計算出來的，所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則后面的實驗結果無從談起。
2、設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內，包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度最陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內。
3、最好采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度，ELISA試劑盒這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現較大的偏離。
4、檢測標準樣品時，應按濃度遞增順序進行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準確性。
5、標準曲線的樣品數一般為7個點，但至少要保證有5個點。
6、做出的標準曲線相關系數因實驗要求不同而有所變動，但一般來說，相關系數R至少要大于0.98，對于有些實驗，至少要0.99甚至是0.999.

elisa試劑盒標準曲線選擇什么擬合方程：

1.在S曲線的低濃度部門可以用乘冪方程很好的擬合，中低濃度部門可以用直線方程，中間部門可用對數方程，而中后段可用四參數。免疫檢測時尺度點（可以是倍比稀釋的，也可以不是）濃度假如和相應的吸光度（OD）值假如能夠呈現直線關系當然是最理想的了，這時可以通過EXELL等利便的獲得擬合曲線，進而推算出樣品的濃度值。

2.關于尺度曲線的擬合方式，直線、二次曲線、三次曲線、指數、對數等雖都可用于ELISA及其它生物學反應中的曲線擬合，但都只合用于曲線的一部門，有的合用于前半段，有的合用于后半段，有的合用于中間一段，而Logistic曲線則對曲線的全部都有較好的合用性。

3.在一個長的區間內，Logistic應該都能擬合得較為理想。假如用來定量，S形曲線的中間段（較陡處）是比較好的，而兩真個平坦部門計算誤差會大，有時甚至會很大。用于免疫檢測的所謂“尺度曲線"實在稱為擬合曲線比較合適。目前國際上最流行的免疫檢測擬合方



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